利用荧光素酶与底物结合发生化学发光发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响
工作原理：
利用荧光素酶与底物结合发生化学发光发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly
luciferase）的上游，构成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。
同时，为了减少内在的变化因素（如：培养细胞的数目和活力的差别，细胞转染和裂解的效率等）对实验准确性的影响，将带有海肾荧光素酶基因（Rinilla luciferase）的质粒（phRL-TK）作为对照质粒与报告基因质粒共转染细胞，提供转染活力的内对照，使测试结果不受实验条件变化的干扰。
在测量过程中，当加入荧光素酶检测试剂II（LARII）时产生萤火虫荧光信号，这样测量萤火虫荧光素酶报告基因。定量萤火虫荧光强度之后，再在同一样品中加入Stop
& Glo®，将上述反应猝灭，并同时启动海参荧光素酶反应，同时进行第二次测量。
具体步骤：
1.报告基因质粒的构建。将目的片段插入到荧光素酶表达的报告基因载体上，如pGL3-basic；
2.转染细胞。将报告基因质粒和phRL-TK(内参)共转染细胞，根据需要对细胞进行处理。共转染时，由于内参具有很强的启动子，因此报告基因质粒：内参转染量一般为10:1~50:1。
3.Luciferase活性测定：
⑴
初次使用时，配制LAR II，即Firefly luciferase的底物。将LAR II溶解在LAR II buffer中，并分装-80℃避光保存；
⑵
转染后的细胞弃掉培养基，用PBS清洗两次，每孔加入100 μl的PLB（Passive
Lysis Buffer）室温轻微振荡15 min，收集细胞裂解液；
⑶
将20 μl细胞裂解液加入发光板后，用GloMax生物发光检测仪读取背景值2 s；
⑷
每样品加入100 μl LAR II工作液，快速混匀，检测读数，即为Firefly
luciferase的值；每样品再加入100 ul Stop&Glo，快速混匀，再次读数，即为Renilla luciferase的值。
⑸
数据处理。首先计算出每管的Firefly luciferase/Renilla luciferase的比值，再以control组的比值为单位1，即可得到不同处理组的相对luciferase活性，也就是该处理组基因转录的调控活性。
客户提供：
1.需提供详细的转录因子、目的基因或microRNA信息；
2.实验细胞，如无特殊要求，洛唯尔默认为使用293T细胞，则无需提供；
*终交付：
实验原始数据和实验报告单。
服务案例：
