RNA甲基化修饰（m6A）整体解决方案
来源:
|
作者:1
|
发布时间: 2025天前
|
2573 次浏览
|
🔊 点击朗读正文
❚❚
▶
|
分享到:
已知RNA存在超过100种修饰。在真核生物中，5’端的Cap以及3’端的polyA修饰在转录调控中起到了十分重要的作用，而mRNA的内部修饰则用于维持mRNA的稳定性。mRNA*常见的内部修饰包括N6-腺苷酸甲基化（m6A）、N1-腺苷酸甲基化（m1A）、胞嘧啶羟基化（m5C）等。RNA甲基化修饰约占所有RNA修饰的60%以上，而m6A是高等生物mRNA和lncRNAs上*为普遍的修饰。目前发现miRNA、circRNA、rRNA、tRNA和snoRNA上都发生m6A修饰。
RNA甲基化中的m6A首先在甲基化转移酶的作用下对RNA上的腺嘌呤（A）进行m6A 修饰，再在去甲基化酶的作用下对已发生m6A修饰的RNA进行去甲基化修饰。*后发生m6A修饰的RNA通过被甲基化阅读蛋白识别后，行驶下游的一系列功能，包括miRNA加工、mRNA出核翻译及剪切等。每个标记都需要一个“写入器（writer）”来放置，一个“擦除器（eraser）”消除，还需要“阅读器（reader）”读取。m6A修饰不仅会影响RNA剪接，还会影响翻译和RNA稳定性。
背景介绍：
已知RNA存在超过100种修饰。在真核生物中，5’端的Cap以及3’端的polyA修饰在转录调控中起到了十分重要的作用，而mRNA的内部修饰则用于维持mRNA的稳定性。mRNA*常见的内部修饰包括N6-腺苷酸甲基化（m6A）、N1-腺苷酸甲基化（m1A）、胞嘧啶羟基化（m5C）等。RNA甲基化修饰约占所有RNA修饰的60%以上，而m6A是高等生物mRNA和lncRNAs上*为普遍的修饰。目前发现miRNA、circRNA、rRNA、tRNA和snoRNA上都发生m6A修饰。
RNA甲基化中的m6A首先在甲基化转移酶的作用下对RNA上的腺嘌呤（A）进行m6A 修饰，再在去甲基化酶的作用下对已发生m6A修饰的RNA进行去甲基化修饰。*后发生m6A修饰的RNA通过被甲基化阅读蛋白识别后，行驶下游的一系列功能，包括miRNA加工、mRNA出核翻译及剪切等。每个标记都需要一个“写入器（writer）”来放置，一个“擦除器（eraser）”消除，还需要“阅读器（reader）”读取。m6A修饰不仅会影响RNA剪接，还会影响翻译和RNA稳定性。
RNA甲基化酶类型总结：
m6A甲基化检测方法：
1.LC-MS/MS：在液相质谱的基础上采用串联质谱，能够获得分子离子峰，可对碱基同时进行定性和定量分析；
2.m6A定量检测试剂盒（比色法）：采用类似于ELISA抑制竞争免疫的方法，能够定量检测总RNA中m6A试剂；；
3.RNA甲基化定量检测试剂盒（荧光法）：使用高效RNA结合液将总RNA绑定在孔板上，使用捕获和检测抗体对m6A进行检测；
4.Dot blotting：将m6A修饰的RNA固定在尼龙膜上，然后用m6A抗体进行免疫反应；
5.m6A-seq：使用带有m6A抗体的免疫磁珠对发生m6A甲基化的mRNA片段进行富集，然后将富集到的mRNA片段纯化后构建高通量测序文库进行上机测序。
RNA甲基化研究思路：
客户提供：
RNA含量≥800μg或细胞数目≥109。
